1. Dôvody precipitácie vo fľašiach na kultiváciu buniek: teplota
Bunková kultúra sa týka spôsobu simulácie prostredia in vivo in vitro, takže bunky môžu prežiť, rásť, reprodukovať sa a zachovať si hlavnú štruktúru a funkciu. Bunkové kultivačné banky sú druhom bunkového spotrebného materiálu bežne používaného v adherentných bunkových kultúrach. Počas kultivácie buniek často zistíme, že sa v kvapaline hromadia nejaké nečistoty. Existuje na to veľa dôvodov a teplota je tiež jedným z častých dôvodov.
Precipitácia vo fľašiach na kultiváciu buniek môže byť kontamináciou buniek. Ak sa vylúči kontaminácia, zákal v médiu bunkovej kultúry sa zvyčajne interpretuje ako precipitácia kovových prvkov, proteínov a iných zložiek média. Precipitáty väčšinou zhoršujú normálnu bunkovú proliferáciu, pretože absorbujú živiny a ďalšie požadované zložky média prostredníctvom chelatácie, čím menia zloženie média. Precipitáty sú mikroskopicky viditeľné a môžu interferovať s experimentmi vyžadujúcimi zobrazovaciu analýzu.
V bunkovej kultúre je teplota jedným z hlavných faktorov, ktoré spôsobujú zrážanie. Plazmatické proteíny s vysokou molekulovou hmotnosťou sa môžu vyzrážať z roztoku, keď sú vystavené extrémnym teplotným zmenám; tepelná inaktivácia a cykly zmrazovania a rozmrazovania môžu podporovať degradáciu proteínov a zrážanie; keďže sa kvapalné alebo rekonštituované médiá medzi jednotlivými použitiami uchovávajú v chlade, môžu sa vyzrážať soli, najmä 10x alebo iné koncentrované zásobné roztoky.
Samozrejme, ak dôjde k precipitácii v kultivačnej banke, ak sa zistí, že je to spôsobené teplotou, je potrebné venovať pozornosť prostrediu skladovania a spôsobu prevádzky média a vyhnúť sa opakovanému zmrazovaniu a rozmrazovaniu, ktoré môže znížiť pravdepodobnosť zrážok.
2. Príčina precipitácie v kultivačnej banke: kovové doplnky
Kovové ióny ako meď, železo a zinok sú nevyhnutné pre rast buniek a sú dôležitými doplnkami bezsérových médií. Neprítomnosť iných zložiek séra v kultivačnom systéme môže viesť k precipitácii týchto kovov, čím sa vytvorí toxické prostredie pre bunky. V prostredí s vyšším pH (všeobecne > 8) majú uhličitanové a hydroxidové ióny a ióny medi, fosforečnanové a hydroxidové ióny a ióny železa, uhličitanové, fosforečnanové a hydroxidové ióny a zinkové ióny, hydroxidové ióny a horčíkové ióny tendenciu vytvárať nerozpustné precipitáty; v oxidačných podmienkach je pravdepodobnejšie, že sa meď a zinok vyzrážajú, čo vidíme vo fľašiach na kultiváciu buniek.
Ako sa teda vyhnúť zrážkam spôsobeným kovovými doplnkami? Môžeme pridať železo viažuci proteín transferín, alebo pridať pufor, aby sme sa vyhli zmenám osmotického tlaku. Na viazanie peroxidácie môžeme do média pridať aj manitol alebo pyruvát. Vodík na minimalizáciu oxidačného stresu.
Jedným slovom, neprepadajte panike, keď dôjde k zrážaniu vo fľaši s bunkovou kultúrou. Špecifická analýza na zistenie príčiny a formulovanie zodpovedajúcich opatrení môže výrazne znížiť výskyt zrážok a zabezpečiť dobrý rast buniek.
veľkosť skúmavky na krv, veľkosť skúmavky na krv, stojan na špičku pipety, najlepší výrobca špičiek na pipety